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关于叶绿素含量测定的原理及步骤

时间:2022-09-17 16:11:36   访客:2782

实验原理
叶绿素广泛存在于水果、蔬菜等绿色植物组织中,与植物细胞中的蛋白质结合形成叶绿体。当植物细胞死亡时,叶绿素就会释放出来。游离叶绿素非常不稳定,对光和热敏感;在酸性条件下,叶绿素形成绿褐色脱镁叶绿素,在稀碱液中可水解成亮绿色叶绿素。酸式盐以及植醇和甲醇。高等植物中的叶绿素有两种:叶绿素a和b,均易溶于乙醇、丙酮和丙酮。
叶绿素含量的测定方法有很多,其中有: 1、原子吸收光谱法:通过测定镁的含量间接计算出叶绿素的含量。 2、分光光度法:用分光光度计测量叶绿素提取物在最大吸收波长处的吸光度值,然后可以利用朗伯-比尔定律计算提取物中各色素的含量
叶绿素a和叶绿素b在645nm和663nm处有最大吸收,两条吸收曲线在652nm处相交。因此,分别测定了提取物在645nm、663nm和652nm波长处的吸光度值,可根据经验公式分别计算出叶绿素a、叶绿素b和总叶绿素的含量。
仪器、原材料和试剂仪器仪器分光光度计、电子顶装天平(灵敏度0.01g)、研钵、棕色容量瓶、小漏斗、定量滤纸、吸水纸、擦拭纸、滴管。原料 新鲜(或干燥)植物叶试剂 1. 96% 乙醇(或 80% 丙酮) 2. 石英砂 3. 碳酸钙粉。
操作步骤
取新鲜的植物叶子(或其他绿色组织)或干燥的材料,擦去组织表面的污垢,去除中脉,切块。称取2g新鲜切碎的样品,放入研钵中,加入少量石英砂、碳酸钙粉和3ml 95%乙醇,研磨成均质浆液,加入10ml乙醇,继续研磨至组织变白.静置 3 到 5 分钟。取1张滤纸放入漏斗中,用乙醇润湿,将提取液沿玻璃棒倒入漏斗中,滤液倒入100ml棕色容量瓶中;用少量乙醇冲洗研钵、杵和残留物几次,最后连同残渣一起倒入漏斗中。用滴管吸去乙醇,将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中。直到滤纸和残渣没有绿色为止。最后用乙醇定容至100ml,摇匀。取叶绿体色素提取物,在665nm、645nm和652nm波长处测定吸光度,以95%乙醇作为空白对照。
计算
根据实验原理中提供的经验公式,分别计算植物材料中叶绿素a、b和总叶绿素的含量。



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